中文简体
Je hebt zojuist een gradiëntmethode uitgevoerd die vorige week perfect werkte. De kalibratiestandaarden zien er schoon uit, maar het monsterchromatogram vertoont een extra piek bij 23,8 minuten. Je vervangt de kolom, bereidt nieuwe buffer voor en controleert de detector. Het hoogtepunt is er nog steeds. Vervolgens verwissel je het water dat in de mobiele fase komt, en het artefact verdwijnt. Dat is de realiteit van hoogwaardige vloeistofchromatografie: de waterzuiverheid zit onder elke scheiding, en als deze verandert, verandert de methode mee.
Waterzuiverheid beïnvloedt de kwaliteit van HPLC-gegevens op vier praktische manieren: basislijnstabiliteit, piekvorm, retentiereproduceerbaarheid en levensduur van het instrument. De betrokken verontreinigingen kunnen organische moleculen, opgeloste ionen, deeltjes of microben zijn. Zelfs een kleine hoeveelheid van één soort onzuiverheid kan gevolgen hebben die niet in verhouding staan tot de concentratie ervan.
De belangrijkste effecten van waterzuiverheid op HPLC
In een HPLC-systeem is water een reagens en geen passieve achtergrond. Het draagt de buffer, lost het monster op en draagt bij aan de detectorachtergrond. Onzuiverheden in water komen daarom rechtstreeks in het analytische signaal terecht. In onderstaande tabel zijn de meest voorkomende verontreinigingen en hun effecten samengevat.
| Verontreiniging | Voorbeelden of bron | Effect bij HPLC |
|---|---|---|
| Opgeloste organische stoffen | Humusstoffen, weekmakers, schoonmaakresten, dampen van oplosmiddelen | UV-absorberende spookpieken, basislijnafwijking, retentieveranderingen |
| Anorganische ionen | Natrium, chloride, silicaat, sporenmetalen | Geleidbaarheidsveranderingen, interferentie in ionenchromatografie en LC-MS, metaalgerelateerde piekverbreding |
| Deeltjes | Harsdeeltjes, stof, neerslag | Verstopte frits, stijgende tegendruk, slijtage van de pompafdichting, luidruchtige basislijn |
| Opgeloste gassen | Zuurstof, kooldioxide, stikstof | Bellen in de detector, basislijnpieken, pH-afwijking |
| Micro-organismen | Bacteriën en biofilms in opslagcontainers | Kolomvervuiling, verstopte frits, valse pieken, instabiliteit van de methode |
Deze effecten zijn niet alleen theoretisch. Een microbiële biofilm in een waterreservoir kan UV-absorberende metabolieten vrijgeven, en zodra die film zich vormt, kan het simpelweg vervangen van het water het probleem mogelijk pas oplossen als het reservoir is gereinigd en ontsmet.
Wat "HPLC-kwaliteit" en type 1 water eigenlijk betekenen
De meeste analytische methoden vereisen water dat voldoet aan de Type 1-specificaties. In praktische termen betekent dit dat de weerstand bij 25 graden Celsius ongeveer 18,2 megahm-centimeter is, de geleidbaarheid bijna 0,055 microsiemens per centimeter is en de totale organische koolstof zo laag is dat het water geen zichtbare UV- of MS-achtergrond creëert. Weerstand alleen is niet genoeg. U moet ook het TOC-niveau, het aantal deeltjes en, in sommige toepassingen, de silicaat- of natriumwaarden kennen.
De pH van gezuiverd water is geen bruikbare specificatie. Ultrapuur water heeft bijna geen buffercapaciteit en absorbeert snel kooldioxide uit de lucht, dus een gemeten pH van rond de 5,6 weerspiegelt eenvoudigweg opgelost CO2. De pH die er toe doet, is de pH van de gebufferde mobiele fase die u bereidt.
De vereisten voor de waterkwaliteit zijn ook afhankelijk van de detector. UV-detectie bij 210 nm is bijzonder gevoelig voor organische vervuiling, omdat daar veel koolstof-zuurstof- en koolstof-stikstofbindingen absorberen. LC-MS heeft water nodig met zeer lage niet-vluchtige onzuiverheden om ionenonderdrukking en adductvorming te voorkomen. Verdampingsdetectoren worden op dezelfde manier beïnvloed door niet-vluchtige verontreiniging omdat ze het achtergrondsignaal verhogen. Type 1 water is daarom een goed uitgangspunt voor vrijwel elke HPLC-toepassing.
Gebotteld water van HPLC-kwaliteit kan werken, maar het moet op de juiste manier worden bewaard en behandeld. Controleer het analysecertificaat, noteer het lotnummer en ga er nooit vanuit dat een oude container vrij is van biologische groei.
Gradiënt-elutie maakt wateronzuiverheden zichtbaar
Wateronzuiverheden zijn het meest zichtbaar bij gradiëntmethoden. In een isocratische run kan een UV-absorberende verontreiniging de basislijn eenvoudigweg een beetje verhogen. In een gradiënt begint de waterfractie hoog en stijgt de organische oplosmiddelfractie in de loop van de tijd. Verontreinigingen kunnen aan de kop van de kolom worden tegengehouden en vervolgens worden geëlueerd naarmate het organische gehalte toeneemt. Dit levert spookpieken en een afwijkende basislijn op die de integratie en kwantificering kunnen verstoren.
Daarom is een blanco verloop een van de eenvoudigste controles van de waterkwaliteit. Voer uw exacte gradiënt uit zonder een monster te injecteren. Als er pieken in de blanco verschijnen, is de mobiele fase verdacht.
Dagelijkse gewoonten die de waterzuiverheid beschermen
Zuiver water blijft niet per ongeluk zuiver. De volgende gewoonten voorkomen de meest voorkomende problemen in de HPLC-praktijk.
- Gebruik water uit een zuiveringssysteem met nieuwe cartridges, een werkende UV-lamp en regelmatige ontsmetting.
- Vang water op in een schone container met dop. Laat de container niet open staan terwijl het systeem draait.
- Bewaar geen water dagenlang. Bereid de mobiele fase zoveel mogelijk dezelfde dag voor met vers water.
- Vermijd het toevoegen van vers water aan een gedeeltelijk gevuld reservoir. Vervang de inhoud van het reservoir in plaats van bij te vullen.
- Voer een blanco gradiënt uit op de golflengte die voor de analyse wordt gebruikt en noteer het resultaat.
- Documenteer de soortelijke weerstand, TOC en de datum van waterwinning in uw analytische gegevens.
Voor laboratoria die flessenwater gebruiken, gelden dezelfde regels. Controleer de houdbaarheidsdatum, sluit de container onmiddellijk na gebruik en giet geen ongebruikt water uit een bekerglas terug in de fles.
Additieven maken van een waterprobleem een methodeprobleem
Mobiele fasen bevatten zelden alleen water. Bufferzouten, zuren, ionenpaarreagentia en enkele gespecialiseerde modificatoren worden in relatief lage concentraties toegevoegd. Als het water sporen van UV-absorberende onzuiverheden bevat, is het mogelijk dat deze onzuiverheden de buffercapaciteit niet veranderen, maar ze kunnen nog steeds in het detectorsignaal verschijnen.
Ionische vloeistoffen worden soms gebruikt als mobiele fasemodificatoren om de piekvorm of selectiviteit te verbeteren. Wanneer u er een kiest, moet dezelfde zuiverheidsnorm van toepassing zijn. Bijvoorbeeld 1-ethyl-3-methylimidazoliumtetrafluorboraat is een veel voorkomende ionische vloeistof voor chromatografisch onderzoek. Het moet worden opgelost in water dat al voldoet aan de Type 1-specificaties; anders wordt het additief een nieuwe bron van verontreiniging. Als u de scheidingsgerelateerde eigenschappen van deze verbindingen wilt begrijpen, kunt u onze overzicht van hoe ionische vloeistoffen presteren in scheidingsprocessen behandelt de praktische variabelen.
CAS: 143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluorboraat Vloeistoffen Leverancier Ldet Technology is China-aangepast CAS: 143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazoliumtetrafluorboraatvloeistoffenleveranciers en 1 -Ethyl-3-methylim... Bekijk Product → Zuiverheid begint bij de leverancier
Bij Zhejiang Ldet produceren we ionische vloeistoffen en speciale chemicaliën. We weten uit de productie dat een spoor van onzuiverheid in een uitgangsmateriaal de prestaties verderop in de keten kan veranderen. Daarom controleren we het watergehalte, de resterende halogeniden en het UV-gedrag voordat we het vrijgeven. Dezelfde discipline hoort thuis in een HPLC-lab: kies materialen met gedocumenteerde specificaties. Bijvoorbeeld 1-butyl-3-methylimidazoliumtetrafluorboraat is beschikbaar met zuiverheidsgegevens waarmee u kunt beoordelen of deze compatibel zijn met uw detectiemethode.
CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazoliumtetrafluorboraat Leveranciers van vloeistoffen Ldet Technology is China's aangepaste CAS: 174501-65-6-1-Butyl-3-methylimidazoliumtetrafluorboraat Vloeistoffenleveranciers en 1-Butyl-3-methylimid... Bekijk Product → Wat u moet controleren op een analysecertificaat
- Resterend halogenidegehalte, omdat halogeniden de ionenuitwisselingsscheidingen en corrosie kunnen beïnvloeden.
- Watergehalte, omdat water de effectieve concentratie van het additief verandert.
- Een UV-spectrum of UV-cutoff, zodat u de achtergrondabsorptie kunt voorspellen.
- Consistentie van lot tot lot, omdat een nieuw lot uw werkwijze niet stilletjes mag veranderen.
Als je hulp nodig hebt bij het matchen van een materiaal met een methode, dan kan dat bespreek zuiverheidsgegevens en aangepaste vereisten met ons technische team .
Behandel water als onderdeel van de methode
Waterzuiverheid bij HPLC is geen eenmalige opzet. Het is een dagelijkse variabele die kan veranderen afhankelijk van het seizoen, de voorraadfles en de staat van het zuiveringssysteem. Gebruik Type 1-water, bevestig TOC en weerstand, ga er op de juiste manier mee om en kies additieven met traceerbaarheid. In een methode die is gebaseerd op nanogrammen analyt, is water nooit 'gewoon water'.
